江苏快3走势图表

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                服务热线

                +8610-84928167

                基因编辑▓类型

                基因编辑●类型

                根据研究的☆不同目的,需要制备不同的3d江苏快3今天走势图的动物模型。当为了研究基因的功能时需要过表达或敲除相应基因。如果全身敲除目的基因会导致动物死亡时,或需要在特定的组织敲除基快三开奖上海因时,可以制备条件敲除小鼠。为了建立基因突变模型时,制备点突变动物模型。制备基因人源化小鼠时,可以进行人源基因的替换。制备不同的动物模型,需采用相应的策略,才能成功获得目标模型。

                全身性敲除

                基因敲除是研◢究基因功能的重要方法。传统ES打靶敲除方ζ 法,周期长,费用高。CRISPR/Cas9在基因敲除方面的优势:效率高,时间短,24天直接获得基因敲除江苏快3精准计划小鼠。


                技术一般的♂流程①

                设计合成gRNA→ 显微注射→ 小鼠出生检测。


                技术优势或适①合应用的研究

                -效率高,可达90%的敲除效率,并且有一定纯合敲除比例。

                -方便检测,从PCR条带的大小,容⊙易区分是否发生敲除。

                -时间短,24天获得基因敲除『小鼠。

                -不受敲除︽片段大小限制,从几十bp到Mb长度的DNA,都能江苏快3app有效敲除。


                成功案例


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                图1:两个Grna切割位点之间江苏快3一定牛走势的~550bp基因序列被敲除,PCR检测,相对于野生带773bp,发∏生敲除的鼠产生~220bp的条带(箭头指向的官方江苏快3下载条带)。


                ?条件性敲除

                当基因敲除会导致小鼠死亡时,需要条件敲除,才能获得成江苏快3app最新版体小鼠用于研究。条件敲除一般使用∩▆Cre-loxp系统,其方福彩快三倒计时图片法是在基因的关键区域的两侧,插入loxp。loxp小快三开奖号码鼠制备好后,与Cre小鼠杂交,获得loxp纯合,Cre阳性的小鼠,这种小鼠在Cre的作用下,loxp发生重组,中间的序列被删除,达▅到敲除基因的目的。目前已经有数百种Cre工具小鼠,可以根据研江苏快三开奖结果号究需要,购买〓或定制Cre工具鼠,在不同的组织器官,达到敲除目的基因。Cre融合ER/ERT2后,可以使用tamoxifen调控Cre入核,实现时间上的调控删除。


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                图1:通过CRISPR辅助,在关键外显子快三开奖结果湖北的两侧通过同源重组,插入两个loxp,在Cre的作用下,loxp之间的外显子被删除,实现基因条件敲除。


                技术一般的〓流程

                打靶载体▓设计→ 载体构建→ 显微注射(EPS打靶)→ 小鼠鉴定。


                技术优势或适合↓应用的研究

                -用于敲除致死的基因

                -非致江苏快3基本走势图死基因,用条件敲除也可以◢在不同的组织,不同的江苏快3开奖查询结果时间敲除基因,获得更多的实验数据。


                成功案例

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                图2:在关键外显子或非快三开奖查询3整数倍的外显子两侧敲入loxp,在Cre的作用下,该区域被删除,导致基因敲卐除。


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                图3:设计Loxp插入位点︾的特异引物与同源臂外侧的引物,通过PCR,可以检测到两个loxp被正确敲入到目的位置江苏快3在线开奖,证明获得条Ψ 件敲除小鼠。



                随机转基因

                随机转基因是一种经江苏快3 今天典的过表达基因小鼠制ξ备策略,不同于江苏快3开奖网站靶向基因编辑,没有受到新兴基因编辑技术的影响。该方法通过将基因随机整合到基因组中,实现目全天江苏快3精准计划的基因过表达。


                技术一般的流㊣程

                过表达载体构建福彩快三开奖结果→ 显微注射→ 小鼠鉴定筛选→ 表达检测→ 品系建立。


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                图1:转基因载体和小鼠制备流程。


                技术优势或∏适合应用的研究

                -可以广谱,或组织特异过表达目的基因。

                -多拷贝插入,比定点插入表达量更高。

                -受整合位置影响,可能表达沉默,或者表达谱错误。


                成功案例

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                图2:通过转基因载江苏快3今天走势图解体特异的引物设计,检测到转基因阳性的小鼠,一般效率在10-20%。


                定点转基因

                定点转基因是将转基因表㊣达载体敲入到Rosa26位点,该位◥点被证明是在所有组织细胞都活跃的区快三开奖结果甘肃域,不会发生随机转基因福彩快三中出现的转基因沉默的现象。常用来制作过表达或条件过◇表达小鼠。条件过表达是在︻目的基因前面插入loxp包围的Stop序列,阻止河北快三开奖结果号码目的基因表达。该小江苏快3是否真实鼠模型与Cre小鼠杂交,能够在Cre表达的组织中,删除Stop序列,从而使目的基因发生表达;过表达小鼠直接获得组成〖性基因表达小鼠。战八方的Rosa26位点的定点↓转基因系统,已经实江苏快三开奖结果预测现长达10kb的定点转基因。


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                图1:Rosa26位置敲入转基因表达载体,制备定点转基因小鼠.



                基因敲入

                基因江苏快三开奖结果查询敲入是指在基因组的特定位置插入一段DNA序列,例如给基因加GFP荧光标签标记蛋白,原位敲江苏快3开奖结果360入制备Cre工具鼠等应用。1kb以下的小片段插入,CRISPR/Cas9效率较高。对于大片段的基因插入,需要使用ES,或者EPS制备下载江苏快三新版本策略才能保证项目周期和效率。


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                图1:把绿色荧光蛋白江苏快3开奖结果大彩鲸敲入目的基因的C端,融合表达,示踪目的基因。


                技术卐一般的流程+图解

                打靶载体设○计→ 载体构建→ 显微注射(EPS打靶)→ 小鼠鉴定。


                技术优势或适合应←用的研究

                -CRISPR用于小片江苏快3走势图表官网段的基因敲入。

                -ES/EPS用于大片段基因敲入。

                -给基因加各种标签,原江苏快3走势位敲入制备Cre工具鼠。


                基因替换

                基因替换指,根据研下载江苏快三在线投注究需要,将小鼠的基因替换为其它物种的基因。可以将基因的部分功能区,或者全基因进※行替换。1kb以下的▓小片段替换,可以采用CRISPR/Cas9策略。对于大片段的基因替换,需要使用ES,或者EPS制备策略福彩快三倒计时图片才能成功。


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                图1:用其它种系的基因,替换小鼠的基因片段。


                技术一般的流○程+图解

                打靶载体】设计→ 载体构建→ 显微注射(EPS打靶)→ 小鼠鉴定。


                技术优势◥或适合应用的研究

                -CRISPR用于小片段的基因替换江苏快3今天走势图一。

                -ES/EPS用于大片段基因替换。


                3)基因人源化小鼠的制备,如PD1等免疫检查点人源化小鼠的制㊣备。


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                图1 EPS小片段敲入效〗率高达90%


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                图2 EPS系统对快三开奖结果内蒙古于长达20kb的江苏快3什么时候开始大片段敲入,也具有很高的效率。


                点突变

                许多疾病由氨基酸突变◥引起,为了构建此类疾病模型,可以将小鼠的对应基因江苏快3是什么的位点进行突变。单链DNA在点突变方面有较高的成功率。


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                图1 单链DNA模板制备点突变小鼠。


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                图2 PCR扩增包含突变位点的序◥列,测序检测发生点突变的小鼠,目标碱江苏快3开奖结果大彩鲸基出现套峰,证明获得杂合突变小鼠。


                技术︻一般的流程

                gRNA设计→ 供体DNA合成→ 显微注射(EPS打靶)→ 小鼠鉴定。


                技术︾优势或适合应用的研究

                -氨基酸突变类小鼠疾病模型模拟

                -CRISPR点突变效率相对较※高